高通量測序技術(shù)(High-throughput Sequencing)是一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定,又稱下一代測序技術(shù)(Next-Generation Sequencing)、二代測序技術(shù),其使得可對一個(gè)物種的基因組和轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行深入、細(xì)致、全貌的分析,所以又被稱為深度測序(Deep Sequencing)。
第二代測序技術(shù)的核心思想是邊合成邊測序(Sequencing By Synthesis),即通過捕捉新合成的末端的標(biāo)記來確定DNA的序列。
文庫構(gòu)建:文庫構(gòu)建即為測序片段添加接頭。無論是PCR產(chǎn)生的片段還是基因組鳥/槍法打斷的片段都具有特異性(PCR中不同樣品反向引物插入了特異性的barcode,因此兩端也是特異的),兩端缺乏必要的引物因此混合DNA/片段不能直接擴(kuò)增和測序。DNA/片段需要加接頭修飾才能進(jìn)行上機(jī)測序,這個(gè)過程稱為二代測序的文庫構(gòu)建。
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